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我司教你:血球計數板細胞計數的方法
更新時間:2020-11-24   點擊次數:1821次

1.制備細胞懸液:

關于懸液培養的細胞,可直接進行下面的過程2(計數與核算進程)。假設計數目標為貼壁生長的細胞,首要需將培養物按如下過程制備成細胞懸液。

①停止培養,將培養液吸出,用PBS洗培養物一次。

②給培養瓶內參加1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期間不斷在鏡下調查。當細胞變圓挨近脫壁時,棄消化液。

③參加一定量的培養液(假設這些培養細胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使細胞脫壁而制成細胞懸液。

2.計數與核算進程

①在細胞計數板中心放置計數的蓋玻片。

②用玻璃虹吸管吸取細胞,讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液,至蓋玻片被液體充滿停止。

③置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。關于壓線的細胞只計數在上線和左線者,關于細胞團按單個細胞計數。

④按下式計數細胞懸液的密度:細胞密度=(4個大格細胞總數/4)×104個/ml 。

二、注意事項:

①必須使松散成單個細胞,取樣計數前,充分混勻細胞懸液。

②顯微鏡下計數時,遇到2個以上細胞組成的細胞團,應按單個細胞核算。假設細胞團>10%,闡明細胞松散不充分。

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