ELISA試劑盒實驗的原理好像很簡樸，不過乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關閉。假定您的布景過高，懷疑關閉不充分，那么您可以檢驗運用更高濃度的關閉液，或恰當延伸關閉時間。血清組分的內在多樣性可使它有用阻撓許多不同類型的分子相互作用。另一個挑選是運用蛋白和非離子型去污劑這兩種關閉液，ELISA試劑盒后者可幫助洗刷過程中的關閉。處理這個題目的一種方法是運用雞或魚的正常血清。好的關閉液應下降非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。在實驗結束時，咱們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于成果的信噪比。
假定您的ELISA試劑盒不幸地碰到了高布景，那么也無需太擔憂，依次檢查ELISA體系中的組分，并掃除可能存在的標題。記住，非特異的抗體結合會添加布景。不過，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。
ELISA試劑盒假定布景過高，而您懷疑洗刷不行時，可以檢驗添加洗刷次數。這種關閉液廉價、不亂，在去除洗刷過程中的一些非特異結合上很有用。假定濃渡過高，ELISA試劑盒或許未準確稀釋，則會導致高布景。常用的蛋白關閉液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。關閉液的作用是讓不相關的蛋白占有微孔板中埋伏的結合位點。
請勿運用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會下降特異結合，發生假陰性。這就下降了可發生信號的抗體非特異結合的機遇。ELISA試劑盒現在主要有兩種類型的關閉液：蛋白和非離子型去污劑。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。假定您一向被布景標題所困擾，那么或許您該花些時間來優化關閉液。
